Nachdem Blade bei einer Verfolgungsjagd einen Menschen getötet hat, wird der Welt erfolgreichster Vampirkiller von der Polizei verhaftet. Natürlich stecken überall eifrige Vampirhelfer in offiziellen staatlichen Posten und suggerieren eine dramatische Situation, aus der es kein Entkommen zu geben scheint. Aber kein Problem: Blade bekommt Verstärkung und wird von einer weiteren Anti-Vampir-Fraktion befreit.
Von jetzt an stehen Blade Ryan Reynolds, Jessica Biehl und andere zur Seite, die aber eigentlich den notorischen Einzelgänger nur belasten und in seinen Augen zunächst nur kindliche Amateure darstellen. Und damit dass auch nicht das einzig belastende Novum für den nachtaktiven Helden darstellt, wird von der Gegenseite, der sich bereits seit der babylonischen Antike durchsaugende, Graf Dracula aufgespürt, zum Leben erweckt und auf Blade gehetzt.

In der irakischen Wüste findet eine Gruppe von Vampiren unter der Führung von Danica Talos (Parker Posey) Draculas Ruhestätte (hier wird er dann zeitgemäß "Drake" genannt). Er soll wieder zum Leben erweckt werden, damit mit siener Hilfe die Menschheit endgültig unterworfen werden kann. Um ihren Plan ohne der Störung von Blade (Wesley Snipes) durchführen zu können, legen sie ihm eine Falle und starten eine Hetzkampagne, so dass Blade fortan als Serienkiller statt als Retter der Menschen gesehen wird und nun gnadenlos vom FBI gejagt wird. Blade verbündet sich mit einer Gruppe menschlicher Vampirjäger, unter Führung von Hannibal King (Ryan Reynolds) und Abigail (Jessica Biel), um den Plan der Vampire zu vernichten.